大多數(shù)培養(yǎng)基需要在121℃下高壓滅菌15-30分鐘，只有少數(shù)介質(zhì)需要加熱溶解而不需要高壓滅菌。特別是無菌試驗中培養(yǎng)基滅菌不徹底直接關(guān)系到檢測結(jié)果。因此，有必要對高壓滅菌器的滅菌效果進(jìn)行驗證。
1試驗數(shù)據(jù)
（1）嗜熱脂肪芽孢桿菌圓盤。嗜熱脂肪芽孢桿菌atcc7053是該方法常用的生物指示劑，其孢子大小為5-l05 CFU/片。
（2） 121℃壓力蒸汽滅菌化學(xué)指示卡。
（3） 溴甲酚紫蛋白胨水培養(yǎng)基在116℃滅菌20min后使用。
（4） 0-150℃保溫溫度計。
2方法與結(jié)果
用無菌鑷子將嗜熱脂肪芽孢桿菌圓盤（以下簡稱菌片）放入密封試管中。將化學(xué)指示卡和保留溫度計放入開口管中。制備5-10份上述兩種試管。單獨放置在高壓滅菌器蒸氣口、底部排氣口和底部出水處，或上下左右各5個中心。如果高壓滅菌器為兩層，應(yīng)放置在10處。
保留點溫度計應(yīng)經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化合格后方可用于檢定試驗。測試前，溫度計的水銀柱應(yīng)在40℃以下?lián)u晃。每次監(jiān)測后，溫度計的溫差應(yīng)保持在1℃之間，說明高壓滅菌器內(nèi)溫度分布均勻。
滅菌片應(yīng)置于滅菌的溴甲酚紫蛋白胨水介質(zhì)中，嚴(yán)格無菌操作條件，在56～60℃下培養(yǎng)24～48h，觀察顏色變化。如果培養(yǎng)基變黃，說明平板中的嗜熱脂肪芽孢桿菌尚未完全滅活，細(xì)菌仍能在培養(yǎng)基中生長，分化為葡萄糖，產(chǎn)酸變黃。如果培養(yǎng)基的基本顏色仍然是紫色，說明孢子已經(jīng)失活。同時，未滅菌紙應(yīng)作為陽性對照放入培養(yǎng)基中，空白紙無紙作為陰性對照。
化學(xué)指示卡上的色塊在高壓滅菌時由淺黃色變?yōu)楹谏?。通過顏色的變化，并與對照色進(jìn)行比較，判斷滅菌效果是否符合要求?；瘜W(xué)指示卡應(yīng)保存在干燥的地方。遇潮變色，影響滅菌效果觀察。
高壓蒸汽滅菌必須使蒸汽順利進(jìn)入高壓滅菌器，接觸滅菌物品，排出原有冷空氣。應(yīng)驗證空載熱擴散和滿載熱穿透（不超過滿載時總體積的2/3）。這兩個試驗重復(fù)三次，共六次。5個點6次試驗結(jié)果表明，溫度為121℃，化學(xué)指示卡變黑，程度與對照顏色一致，培養(yǎng)基顏色無變化，說明高壓蒸汽滅菌合格。
高壓滅菌器屬于強制檢測儀器，但強制檢測只檢測儀器的物理參數(shù)。因此，有必要對經(jīng)過嚴(yán)格測試的高壓滅菌器的滅菌效果進(jìn)行驗證。有些單位經(jīng)常忽視這個重要問題。市場上銷售的手提式滅菌器往往指針達(dá)到要求的溫度，但滅菌物品的實際溫度卻不符合要求。導(dǎo)致滅菌不徹底，影響檢測結(jié)果。培養(yǎng)基滅菌不徹底影響培養(yǎng)基的使用和結(jié)果的判斷。因此，有必要對高壓滅菌器的無菌效果進(jìn)行驗證。